美國PE色譜柱的正確使用包含:加裝保護柱,過濾流動相和樣品,凈化樣品,避免過高的柱壓等。
美國PE色譜柱加裝保護柱的作用是過濾掉來自流動相和樣品的化學“拉圾”同時也可以有效除去流動相和樣品中的不溶物。盡管現(xiàn)在的色譜儀在流動相吸入口、進樣閥后部以及在色譜柱的兩端都裝有不同孔徑的濾器,但濾器只能除去不溶性顆粒而不能除去化學污然,因此,加裝保護柱是必要的,特別是在分析中藥、中成藥等復雜混合物和生物樣品時更是保護分析柱*的措施。保護柱填料應與分析柱一致,粒徑可較分析柱大。保護柱屬消耗品,經(jīng)過一定次數(shù)的樣品分析后,出現(xiàn)柱壓顯著升高或峰形變壞或基線漂移時,應考慮更換保護柱。
過濾流動相和樣品:流動相通常由水或緩沖溶液與有機溶劑混合而成,原則上,所有經(jīng)過色譜柱的流動相均應過濾,但在實際操作上應視具體情況而有所區(qū)別:當有機溶劑用色譜純級,水用石英亞沸水或其它超純水時,在能確保水和有機溶劑的質(zhì)量且沒有受到污染時,過濾并無更多實際意義。當流動相中含有緩沖鹽時,則過濾是必要的,如前所述,當緩沖溶液放置一段時間后,在使用前還應重新過濾。裝流動相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線濾器要定期清洗和更換,以避免濾器因過載而起不到過濾作用。
凈化樣品:當樣品中含有對色譜柱有損害的化學成分,如產(chǎn)生長久性吸附的蛋白質(zhì)、糖等有機分子和強吸附性物質(zhì),以及可能對柱填料產(chǎn)生破壞作用的基團離子。在進樣前應盡可能對樣品進行分離提純以除去多余雜質(zhì)組分。
避免過高的柱壓:雖然美國PE色譜柱能耐受的壓力可達高,但過高及過大的壓力變化均會縮短色譜柱的壽命,避免的方法是柱壓過高時,盡可能采用較小的流速,以不超過柱最大允許壓力的一半為宜。當流速較大時,應采取流速梯度的辦法使流速分步到位。使用手動進樣閥時,進樣閥的切換要盡可能的快。否則超過20%的壓力沖擊會很快使柱報廢。當使用多柱聯(lián)用時,柱切換要避免在高壓下進行。